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实时荧光定量PCR

扩增曲线.jpg溶解曲线.jpg

实时荧光定量PCR

实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。

Real-timePCR是在PCR扩增过程中,通过荧光信号,对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期,模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以成为定量的依据。SYBRGreen:

PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

流程

1. 根据目的基因设计合成引物或TaqMan探针

2. 提取待测样本总RNA并进行逆转录

3. 根据选择方法进行荧光定量PCR 检测(含三重复)

4. 数据分析与处理,并整理完整实验报告

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